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[摘要] 目的探讨免疫荧光定量床旁检验法（Point-of-Care Test，POCT）与全自动生化分析仪检测血清C反应蛋白（C-Reactive Protein，CRP）的结果是否具有可比性。方法依照美国国家临床实验室标准化委员会（CLSI）EP9-A文件规定，收集符合要求的临床样本（包括该项目的高、中、低值）每天8份新鲜血清标本，连续收集5 d，共40份样本，用POCT仪器i-CHROMA Reader干式免疫分析仪及配套的试剂盘片与AU2700生化分析仪的检测结果进行比对研究。结果CRP在POCT仪与AU2700生化分析仪上检测结果相关性良好，R 2＞0.98，但两系统的检测结果存在一定偏差，通过比对试验可对仪器进行校正，使两者之间结果具有可比性。结论POCT法能简便、快速、准确的检测血CRP浓度，非常适用于各类医院门、急诊血CRP浓度的检测，但是必须做好其质量控制、定期做比对试验，及时进行校正，以期使其结果准确并具有可比性。

[关键词]即时检验；C反应蛋白；生化分析仪；i-Reader免疫荧光分析仪；性能评价；医疗设备质量控制

引言

随着医学检验技术的进步，近年来床旁诊断（Point-of-Care Test，POCT）技术获得了飞速发展。其实现了在病人身边快速诊断进而改善病患治疗的效果，在临床科室急诊、危重病房病人的辅助诊断和治疗监察中可发挥重要作用。POCT具有简便、快速、准确的检测血清C反应蛋白（C-Reactive Protein，CRP）浓度等优势，但是，必须做好其质量控制、定期做比对试验，及时进行校正，只有在检测结果准确和可信时才能很好地应用于各类医院门、急诊血CRP浓度的检测。所以POCT检验质量的控制变得越来越重要，及时提供准确、可靠的检验结果是临床实验室的质量目标 [1-2]。为了能给医生提供及时的诊断依据，我科门诊引进了韩国i-CHROMA Reader免疫荧光分析仪，采集患者末稍血作为检测全血，本研究根据医学实验室认可的CLSI文件POCT09-A要求 [3]对本科室i-reader干式免疫分析仪与AU2700全自动生化分析仪测定CRP结果进行比对。

1 材料与方法

从我院2015年1月～2015年3月检测标本中选取40份无溶血、脂血、及黄疸的新鲜血清及全血标本，并含CRP高、中、低3个浓度水平。

以实验室使用成熟的AU2700生化分析仪作为比较仪，其检测CRP原理采用免疫比浊法，以韩国i-Reader免疫荧光分析仪作为实验仪，其原理为免疫荧光定量技术及干化学层析方法。

分别采用两仪器厂家提供的原装配套试剂，原装配套定标液、质控品。

常规开机后用各自配套定标液及配套质控样品进行定标和质控，确保质控在控，每天各检测8个样本，每个样本按正反顺序各测定2次，共测定5 d。取各自的配套质控血清在两台仪器间进行批内，批间重复性实验。

对方法内和方法间进行组内与组间离群值检查，双份测定的相对差值＞1/4均值的数据为离群数据应剔除 [4]。1.4.3 Χ取值范围检查

通过相关系数R 2评估比较仪器AU2700纳入数据范围是否适合。若R 2≥0.95则认为纳入数据范围适合。如果R 2能满足上述要求，则可认为x变量的误差已被数据范围所抵消，并且可以用简单的直线回归来估计斜率和截距。

在医学决定水平浓度处,利用回归方程得出预期偏倚及95%可信区间，以“1/2允许误差”为标准，将预期偏差的可信区间与之进行比较判断 [4]。

因考虑到标本结果受红细胞压积（Hematocit，Hct）的影响，故Hct异常需校正 [5]。校正公式：全血CRP（校正后）=全血CRP（校正前）×（1-0.425）/（1-实测Hct）。校正后的数据计入统计分析。

2 结果

各取一瓶配套质控血清，在AU2700全自动生化分析仪和i-Reader荧光免疫分析仪上检测CRP，按CLSI评价，得出批内、批间CV%分别为AU2700 3.98%、2.67%，i-Reader为4.17、5.28%均符合小于20%的临床要求。

AU2700与i-Reader两台仪器内部CRP均无离群点，两仪器间有两离群点，在文件允许的范围内被删除，重新进行检测补上。

AU2700与i-Reader血清测定均值散点图，见图1。可以看出i-Reader免疫分析仪与AU2700全自动生化分析仪测定血清CRP的回归方程为y=1.0675x+0.8799,其散点基本在一条直线上（R 2=0.9881），说明其相关性较好。

图1 AU2700与i-Reader血清测定均值散点图

AU2700与i-Reader全血（校正后）测定均值散点图，见图2。可以看出i-Reader免疫分析仪与AU2700全自动生化分析仪测定全血(校正后)的CRP回归方程为y=1.0372x+1.6873，两种仪器检测值基本在一条直线上（R 2=0.9887），说明两种仪器相关性良好。

图2 AU2700与i-Reader全血（校正后）测定均值散点图

i-Reader血清与i-Reader全血测定均值（校正后）散点图，见图3。可以看出i-Reader免疫分析仪测定血清和全血（校正后）CRP的散点图几乎是在一条直线上（R 2=0.9965），说明其相关性非常好。

图3 i-Reader血清与i-Reader全血测定均值（校正后）散点图

AU2700与i-Reader测定均值的偏差散点图，见图4。以两种方法测定血清CRP的均值差作为纵坐标，以AU2700全自动生化分析仪测定血清CRP作为横坐标作图。从图中可以看出散点大多数位于横坐标上方，说明用免疫分析仪测定血清CRP值比用AU2700全自动生化分析仪测定略偏高，据此我们可以对i-Reader免疫分析仪进行校正。

图4 AU2700与i-Reader测定均值的偏差散点图

两种仪器测定血CRP的结果具有较好的相关性，回归方程为y=1.0675x+0.879，R 2=0.9881，AU2700血清与i-Reader全血校正后回归方程为y=0.9696x+0.9252，R 2=0.9987。按CRP项目医学重要水平点（10、50、100 mg/L）计算方法间的系统误差，相对偏差结果，见表1。

表1 AU2700与i-Reader CRP测定结果的偏差（%）

标本 SE (x=10) SE (x=50) SE (x=100)血清 15.5 8.5 7.6全血 (校正后) 20.6 7.1 5.4

3 讨论

CRP是一种急性时相蛋白、由肝细胞合成，在正常情况下CRP以微量形式存在于健康人血清中，当机体有急性炎症、感染、创伤和心血管疾病时会成倍增高 [6-7]。它在感染发生后6～8 h即开始升高，24～48 h达到高峰，高峰值可达到正常的数百倍,在感染消除后其含量可急骤下降，一周内可恢复正常。当有细菌、真菌感染时血清中CRP迅速升高 [8]，可用于鉴别诊断病毒或细菌感染、判断合并细菌感染、判断疾病程度和活动性；动态监测病程和判定抗生素疗效。其中高敏CRP可用于新生儿感染性疾病的诊断和心血管疾病危险分级 [9]。

POCT被定义为“在接近患者治疗处，由未接受临床实验室学科训练的临床人员或者患者进行的临床检验，是在传统、核心或中心实验室以外进行的一切检验 [10]。它作为临床检验领域的一种快速检测手段，近年来取得了快速的发展，随着其功能和检测项目的不断完善和应用范围的不断拓展，已经含盖了生化、免疫、凝血、微生物等各个领域 [11]，必将在临床检验中占有极为重要的地位 [12]。但是POCT作为检验医学的新领域还存在很多有待解决的问题，比如组织管理、质量控制、操作人员的培训等一系列的问题，其中如何保证高质量的检测结果成为POCT应解决的主要问题。为了使其更好的服务于临床，我们在使用POCT时必须首先做好质控，在控情况下方可发出检验报告，若失控就需查找原因，直至在控为止；其次要定期与检验科仪器作比对试验，适时对仪器进行校正 [13]；再者还应接受临检中心室内质控、室间质评和盲点现场检测的考核。

我科使用韩国i-CHROMA Reader免疫荧光分析仪就是POCT仪器的一种，可以测定血清及全血CRP，它具有体积小、容易使用、结果快速、采血量少等优点，适用于门诊、急诊、及儿科患者的及时检验 [14-15]。它采用的是免疫荧光定量技术，干化学层析方法，分析样本在板条上移动的过程中形成免疫复合物，通过检测区域/质控区域的值与分析样本不同的浓度获得的标准曲线，可检测样本中分析物的浓度。血清或全血CRP测定经常用于门、急诊病人判断病毒或细菌感染中，本研究按照EP9G-A2文件的要求对POCT分析仪和AU2700全自动生化分析仪的测定结果进行相关性分析。我们将AU2700血清与i-Reader血清，AU2700血清与i-Reader全血（校正后），i-Reader血清与i-Reader全血（校正后）分别进行比较分析，结果显示两种检测系统及同种检测系统的血清及全血检测的相关性均良好 [16]，但对于POCT分析仪的偏倚评估结果显示在CRP的医学决定水平10 mg/L处存在15.5%和20.6%的相对偏差，提示测定结果应予以校正，而我们正好提供了校正的参数依据，经过校正后保证了不同仪器间检测结果的一致性。

POCT是检验医学发展的必然产物，是医学进步和科学技术发展推动产生的仪器小型化和操作程序简便化的结晶，是当代科技信息化的反映，它已经在临床检验领域兴起和应用 [17]，检测指标越来越多，数据管理越来越完善,我们期望着它能更好的成为常规实验室的有益补充，为医患双方提供更加有用的帮助。

[1] 丛玉隆,冯仁丰,陈晓东.临床实验室管理学[M].北京:中国医药科技出版社,2004:111-114.

[2] 焦连亭.我国生化分析仪临床应用中应注意的若干问题[J].中华检验医学杂志,2005,28(5):472-474.

[3] Clinical and aboratory Standards Institute Document POCT 09-A Selection Criteria for point-of care Testing Devices; Approved Guideline[S].USA:CLSI,2010.

[4] Clinical and Laboratory Standards Institute EP9-A2 Method comparison and bias estimation using patient samples: approved guideline-2nd edition[S].USA:CLSI,2002.

[5] 卓兰云,黎小琼,何敏,等.POCT仪器与全自动生化分析仪C反应蛋白检测结果的比对[J].广东医学,2014,35(1):110-111.

[6] Najar RA,Ghaderian SMH,Panah AST.C-reactive protein (CRP) gene polymorphisms: implication in CRP plasma levels and susceptibility to acute myocardial infarction[J].Mol Biol Rep, 2012,39(4):3705-3712.

[7] Tillet WS,Trancis T.Serological reactions in pneumonia with a non-protein somatic fraction of the pneumococcus[J].J Exp Med,1930,52(4):561-571.

[8] Jakobsen KA,Melbye H,Kelly MJ,et al.Influence of CRP testing and clinical findings on antibiotic prescribing in adults presenting with acute cough in primary care[J].Scand J Prim Health Care,2010,28(4):229-236.

[9] 汤圣兴.CRP与心血管疾病[J].皖南医学院学报,2008,27(3):157-159.

[10] 彭燕,胡娟.POCT发展现状及临床应用[J].西南国防医药, 2009,19(2):259-260.

[11] 万本愿,姜青龙.POCT的临床应用及存在问题[J].实验与检验医学,2011,29(4):387-390.

[12] 黄祥芬.即时检验(POCT)发展现状与应用[J].中外医学研究, 2011,9(25):154-156.

[13] 张妍,王薇,何法霖,等.床旁即时检测（POCT）的质量控制[J].现代检验医学杂志,2014,29(3):162-165.

[15] 金明超,任春云,王星.i-CHROMA TMReader免疫荧光分析仪测定超敏C反应蛋白性能评价[J].实验与检验医学,2014, 32(2):227-229.

[16] 易鹏.两种方法检测CRP和HSCRP的结果对比[J].华夏医学, 2015,28(4):95-98.

[17] 李艳,包安裕.POCT在检验医学领域的应用进展[J].微循环学杂志,2009,19(4):52-55.

DUAN Xiu-qun, TIAN Huan, GONG Guo-fu
Clinical Laboratory, Ezhou Central Hospital, Ezhou Hubei 436000, China

Abstract： ObjectiveTo investigate whether the immune fluorescence quantitative point-of-care test (POCT) result and automatic biochemical analyzer test result are comparable in measuring serum C-reactive protein. MethodsAccording to the EP9-A file specified by the National Committee for Clinical Laboratory Standards, we collected clinical samples that meet the requirements (including high, medium and low value of the project). Altogether 40 samples were collected for 5 consecutive days with 8 fresh serum specimens per day. Test results of i-CHROMA Reader dry immunity analyzer and accessory reagent blanks and AU2700 biochemical analyzer were comparatively researched. ResultsTest results of C-reactive protein in POCT device and AU2700 biochemical analyzer were in good correlation, R 2＞0.98, but there was a certain deviation in the test results of two methods, through comparative test of instrument calibration, the two results become comparable. ConclusionPOCT method is simple, and can rapidly and accurately detect serum C-reactive protein concentration; it is suitable for all kinds of hospital outpatient and emergency serum C-reactive protein detection. But its quality control must be done and must do comparison test on a regular basis, timely calibrate in order to make its results accurate and comparable.

Key words：point-of-care test; C-reactive protein; biochemical analyzer; i-Reader fluorescence immunity analyzer; performance evaluation; medical equipment quality control

两种仪器测定血清C反应蛋白的性能比对分析

引言

1 材料与方法

2 结果

3 讨论